使用猴5-羟色胺（5-HT）ELISA试剂盒进行检测时，为确保实验结果的准确性与可重复性，需严格遵循操作规范。以下为关键注意事项：
1.样本采集与处理
血清或血浆样本应使用无菌容器采集，避免溶血或脂血干扰。采集后尽快离心分离（3000 rpm，15分钟，4℃），取上清分装保存于-80℃，避免反复冻融。检测前在冰上解冻，充分混匀后离心去除杂质。
2.试剂准备与平衡
试剂盒从冷藏环境（2-8℃）取出后，需在室温（20-25℃）平衡30-60分钟，尤其是酶标二抗和显色液，温度过低会影响反应效率。标准品复溶时应轻柔震荡，避免产生气泡。
3.加样规范
使用多通道移液器加样，确保量程准确、操作一致。标准品与样本建议做双复孔，减少误差。加样时枪头勿接触孔壁或已有液体，防止交叉污染。加样后立即盖好封板膜，避免蒸发或污染。
4.孵育与洗涤
孵育过程应在推荐温度下避光进行，避免温度波动。洗涤步骤至关重要，建议使用自动洗板机或手工充分冲洗，每孔注入洗涤液300-400μL，注满微孔，静置30秒后弃去，重复5次。最后一次拍干需彻底，但避免孔内残留水滴。
5.显色与终止
显色时间应严格控制，根据说明书建议时间（通常15-30分钟）及时加入终止液，颜色由蓝变黄即停止反应。显色过程中避免阳光直射。
6.读数与数据处理
终止后尽快在450nm波长下测定吸光度（参考波长630nm校正），建议在15分钟内完成读数。绘制标准曲线时使用四参数拟合（4PL），确保R2 ≥ 0.99。
实验全程应做好记录，包括批号、操作时间、环境温湿度等，确保数据可追溯。严格按照说明书操作，是获得可靠结果的基础。
